Kung kailangan mo ng anumang tulong, mangyaring huwag mag -atubiling makipag -ugnay sa amin
Ang iyong protein circular dichroism spectrum ay mukhang perpekto kahapon. Ngayon ang baseline ay kurba pataas sa ibaba 215 nm, ang signal-to-noise ratio ay bumagsak, at ang pangalawang-structure fitting ay nagsasabing ang alpha-helix ay bumaba mula 40 porsiyento hanggang 25 porsiyento. Walang nagbago sa sample. Ang karaniwang suspek ay nakaupo sa sample holder: isang quartz cuvette na hindi malinis. Ang paglilinis ng quartz cuvettes para sa CD spectroscopy ay isang nakagawiang hakbang na minamaliit ng mga laboratoryo, at ito ang unang lugar na titingnan kapag ang kalidad ng data ay bumaba nang hindi inaasahan.
Ang pangunahing konklusyon ay maaaring sabihin sa simula: ang isang cuvette na mukhang ganap na malinis sa nakikitang mga wavelength ay maaari pa ring maging sakuna na marumi sa 190 hanggang 230 nm, kung saan karamihan sa mga pagsukat ng CD ng protina ay ginawa. Ang pagkakaiba sa pagitan ng isang magagamit na baseline at isang wasak na spectrum ay kadalasang isang pelikulang masyadong manipis upang makita. Ipinapaliwanag ng gabay na ito kung bakit kakaibang sensitibo ang CD spectroscopy sa kondisyon ng cuvette, kung paano matukoy ang bawat uri ng contaminant, kung aling paraan ng paglilinis ang nagpapanumbalik sa optical surface, kung aling mga pagkakamali ang nagdudulot ng permanenteng pinsala, at kung paano i-verify na ang isang cuvette ay talagang handa na para sa isang pagsukat.
Ang mga protocol sa ibaba ay mga praktikal na pamamaraan na ginagamit sa karaniwang gawaing biophysics ng protina. Ang mga ito ay katugma sa quartz at fused silica cuvettes mula sa anumang kagalang-galang na tagagawa ng quartz cuvette, at ang mga ito ay inutusan mula sa hindi gaanong agresibong pang-araw-araw na pagbabanlaw hanggang sa mas malalim na mga hakbang sa pag-decontamination na ginagamit lamang kapag hindi sapat ang regular na paglilinis.
Sinusukat ng pabilog na dichroism ang maliit na pagkakaiba sa pagsipsip sa pagitan ng kaliwa at kanang pabilog na polarized na ilaw. Ang karaniwang CD band na sampung millidegree ay tumutugma sa isang absorbance difference na humigit-kumulang 3 x 10^-4 AU, sampu hanggang isang daang beses na mas maliit kaysa sa mga absorption band na naitala sa isang regular na UV-Vis spectrum. Anumang optical artifact mula sa cuvette ay samakatuwid ay hindi isang maliit na pagwawasto; ito ay isang nakikipagkumpitensyang signal na maaaring lumampas sa totoong spectrum. Ang sensitivity na ito ay ang dahilan kung bakit ang mga malinis na cuvette ay isang paunang kondisyon para sa wastong data ng CD, hindi isang detalye na i-optimize sa ibang pagkakataon.
Ang malayong-UV na rehiyon ay naglalagay ng karagdagang pasanin sa optical material. Mas mababa sa 200 nm, ang tubig, dissolved oxygen, at maging ang mga high-purity buffer na bahagi ay sumisipsip nang husto. Ang isang fused silica window ay dapat magpadala ng mas maraming limitadong ilaw hangga't maaari. Ang isang marumi o nasirang bintana ay nakakabawas sa photon flux, pinipilit ang detector na makakuha ng mas mataas, at pinapataas ang ingay nang mas mabilis kaysa sa karamihan ng iba pang mga diskarte sa spectroscopy. Sa pagsasagawa, ang malayong UV CD sa ibaba 210 nm ay ang pinaka-hinihingi na cuvette application na makakaharap ng isang laboratoryo.
Ang kondisyon ng cuvette ay nakakaapekto sa data ng CD sa pamamagitan ng apat na independiyenteng mekanismo. Una, binabawasan ng isang sumisipsip na pelikula ang ipinadalang liwanag at pinapataas ang boltahe ng dynode ng photomultiplier. Pangalawa, ang mga particle at micro-scratches ay nagkakalat ng liwanag, na natukoy bilang baseline offset at ingay. Pangatlo, ang mekanikal na stress o pag-ukit sa quartz ay nagpapakilala ng birefringence, na nagko-convert ng linearly polarized na liwanag sa isang maliwanag na ellipticity artifact. Pang-apat, binabago ng isang magaspang o nakadeposito na ibabaw ang epektibong haba ng landas na talagang sinasampol ng sinag. Ang bawat mekanismo ay humahantong sa isang iba't ibang pattern ng pagkabigo sa spectrum, kung kaya't ang isang sistematikong diskarte sa paglilinis ay kinakailangan.
Tinutukoy ng pagpili ng cuvette material kung gaano kalayo sa malayong-UV ang instrumento. Ang synthetic fused silica ng JGS1 grade ay transparent sa ibaba 180 nm at ito ang pamantayan para sa protein far-UV CD. Ang natural na fused quartz na itinalagang JGS2 ay nagpapadala ng makatwirang sa humigit-kumulang 200 nm at katanggap-tanggap para sa malapit-UV CD at regular na UV-Vis na trabaho. Ang JGS3 quartz ay na-optimize para sa infrared transmission at walang lugar sa isang CD cuvette. Ang borosilicate glass ay sumisipsip nang husto sa ibaba ng humigit-kumulang 320 nm at ganap na hindi angkop para sa CD.
| Materyal na grado | Praktikal na mas mababang wavelength | Karaniwang paggamit ng CD |
|---|---|---|
| Synthetic fused silica (JGS1) | 170-180 nm | Far-UV CD ng mga protina, peptide, at nucleic acid na mas mababa sa 200 nm |
| Fused quartz (JGS2) | Mga 200 nm | Near-UV CD at nakagawiang pagsukat ng UV-Vis |
| Infrared optical quartz (JGS3) | Mga 250 nm | Hindi inirerekomenda para sa UV CD |
| Borosilicate glass | Mga 300-320 nm | Hindi magagamit para sa CD o sub-320 nm UV measurements |
Kahit na ang isang malinis na cuvette ay maaaring hindi magamit kung ang bintana ay scratched. Ang mga gasgas ay nagkakalat ng liwanag at lumilikha ng mga lokal na pagkakaiba-iba sa haba ng landas; nangongolekta din sila ng mga kontaminant sa susunod na cycle ng paglilinis at halos imposibleng alisin. Ito ang dahilan kung bakit ang paglilinis ay hindi mapaghihiwalay mula sa paghawak: ang walang ingat na paggamit ay lumilikha ng pinsala na ginagawang kahit na ang pinakamahusay na protocol ay nabigo.
Kahit na ang mga cuvette ay eksklusibong ginagamit na may mataas na kadalisayan ng tubig at mga buffer na may gradong HPLC, ang mga pelikulang may kontaminasyon ay naiipon. Ang mga biological sample mismo ang pinakakaraniwang pinagmumulan, dahil ang mga protina, peptide, nucleic acid, at lipid ay may posibilidad na mag-adsorb sa mga fused silica surface. Ang pakikipag-ugnay sa balat, ang kapaligiran ng laboratoryo, at maging ang mga materyales sa packaging ay nagdaragdag ng kanilang sariling mga deposito. Ang pagtukoy sa uri ng pelikula ay kapaki-pakinabang, dahil ang bawat klase ng kontaminasyon ay tumutugon sa ibang kimika ng paglilinis.
| Contaminant | Karaniwang pinagmulan | Nakikitang tanda | Karaniwang epekto sa isang CD spectrum |
|---|---|---|---|
| Pelikulang protina | Ang mga sample ng protina ay naiwan upang matuyo; adsorption sa panahon ng pagsukat | Karaniwang hindi nakikita | Sloping baseline at tumataas na pagsipsip sa ibaba 230 nm; mga maling negatibong banda malapit sa 218 nm |
| Lipid o hydrophobic film | Liposomes, suwero, plasticizer leachates | Mga butil ng tubig sa bintana | Scatter at baseline na ingay; hindi pantay na meniskus |
| Buffer salt crystals | Pagsingaw ng mga droplet o mga sample na may mataas na asin | Mga puting mala-kristal na spot sa mga mukha | Malakas na broadband absorption at scattering; tulis-tulis na baseline |
| Mga fingerprint | Paghawak nang walang guwantes | Malabong butik, kadalasang hindi napapansin | Matinding pagsipsip sa ibaba 250 nm; baseline offset at maliwanag na ellipticity |
| Alikabok at mga hibla | Air, tissue wipes, binuksan na cuvette box | Nakikitang mga particle sa bintana | Rayleigh scattering, ingay spike, nabawasan ang magagamit na signal |
| Solvent residue | Hindi kumpletong pagbanlaw pagkatapos ng paghuhugas ng solvent | wala | Mga banda ng pagsipsip na umaasa sa haba ng daluyong, depende sa solvent |
Upang maunawaan kung bakit mahalaga ang disiplina sa paglilinis, isaalang-alang kung ano talaga ang ginagawa ng manipis na contaminant film sa isang wavelength na nauugnay sa CD. Ang mga bar sa ibaba ay nagpapakita ng kinatawan ng maliwanag na mga halaga ng pagsipsip na idinagdag sa 220 nm ng iba't ibang uri ng contaminant na naiwan sa isang quartz cuvette. Ang wavelength na ito ay nasa loob ng malayong-UV na rehiyon kung saan ang peptide chromophore ay gumagawa ng pinakamalakas nitong CD signal. Ang mga halaga ay naglalarawan at batay sa mga obserbasyon na iniulat mula sa mga laboratoryo sa pagbuo ng pamamaraan. Basahin ang mga ito bilang isang praktikal na pagraranggo: kung mas malaki ang idinagdag na absorbance, mas agresibo ang contaminant na dapat ibukod sa panahon ng paglilinis.
Ang mga fingerprint ang pinakanakapipinsalang karaniwang contaminant, na nakakagulat sa maraming user. Ang mga pagtatago ng balat ay naglalaman ng mga amino acid, urea, at fatty acid na malakas na sumisipsip sa ibaba 250 nm. Ang isang hindi sinasadyang pagpindot sa optical face ay maaaring magdagdag ng higit sa 0.1 AU sa 220 nm. Ang mga pelikulang protina ay pumapangalawa, at ang mga ito ang pinaka mapanlinlang dahil ang isang monolayer ay hindi nakikita ng mata. Kahit na ang isang sub-monolayer na protein film ay gumagawa ng sloping baseline sa rehiyon ng amide. Ang slope ay kadalasang napagkakamalang instrument drift o buffer mismatch. Ang mga kristal ng asin at alikabok ay pangunahing gumaganap bilang mga sentro ng pagkakalat sa halip na mga sumisipsip. Ang scattering ay lumilikha ng ingay at isang patayong offset na hindi maaalis ng isang simpleng blangko na pagbabawas. Ang solvent residue ay ang pinakamadaling problema upang ayusin, ngunit ang presensya nito ay karaniwang nagpapahiwatig na ang hakbang sa pagbanlaw ay minadali. Ang mga ganap na halaga sa chart ay kinatawan, hindi pangkalahatan; depende sila sa kapal ng pelikula, eksaktong wavelength, at cuvette pathlength. Ang mahalaga ay ang pagkakasunud-sunod ng magnitude: ang mga contaminant sa hanay na 0.05 hanggang 0.1 AU ay naghihiwalay ng flat baseline ng CD mula sa isa na lumalabas sa magagamit na hanay. Ang praktikal na takeaway ay ang isang visually perfect na cuvette ay maaari pa ring maging marumi sa malayong UV, kaya ang pag-verify ay hindi kailanman opsyonal.
Upang gawing kongkreto ang paghahambing, ang isang well-maintained na quartz cuvette na puno ng tubig ay dapat magpakita ng baseline offset sa ibaba 0.01 AU sa 220 nm. Kapag ang offset ay lumampas sa 0.05 AU, ang CD spectrum ay magpapakita ng isang mataas, maingay na baseline sa ibaba 220 nm, at ang pangalawang-structure deconvolution ay magiging hindi maaasahan. Ipinapalagay ng mga database ng reference na spectra ng protina na ang kontribusyon ng cuvette ay bale-wala; ang pagkopya sa mga kundisyong iyon ay nangangailangan ng parehong disiplina sa paglilinis na ginagamit ng mga sangguniang laboratoryo.
Ang pang-araw-araw na protocol ay idinisenyo para sa isang layunin: upang alisin ang sample bago ito magkaroon ng pagkakataong mag-adsorb nang permanente. Para sa mga cuvette na ginagamit sa CD, ang paglilinis ay bahagi ng workflow ng pagsukat, hindi isang paminsan-minsang gawain. Ang isang cuvette na binanlawan nang tama pagkatapos ng bawat pagsukat ay bihirang nangangailangan ng agresibong malalim na paglilinis. Ang buong sequence ay tumatagal ng humigit-kumulang limang minuto at gumagamit lamang ng mga reagents na ligtas para sa fused silica.
Maraming praktikal na punto ang gumagawa ng pagkakaiba sa pagitan ng perpektong baseline at marginal. Palaging alisan ng tubig ang cuvette gamit ang pipette sa halip na ibuhos. Gumamit ng maraming dami: ang 10-volume na banlawan ay nangangahulugang sampung beses ang panloob na volume ng cuvette, hindi sampung patak. Ang panghuling pagbanlaw gamit ang methanol o ethanol ay lubos na inirerekomenda para sa CD work dahil ang methanol ay mabilis na sumingaw at pinipigilan ang mga batik ng tubig. Ang isang kilalang CD protocol, halimbawa, ay tumutukoy sa pagbabanlaw ng tubig at methanol gamit ang isang cuvette cleaning setup at pagpapatuyo ng nitrogen; ang simpleng formula na iyon ay nananatiling benchmark para sa karaniwang gawain.
| Hakbang | Solusyon | Oras ng pakikipag-ugnayan | Bakit ito mahalaga |
|---|---|---|---|
| Alisin ang maramihang sample | Sample na buffer | Ilang segundo | Pinipigilan ang adsorption ng protina mula sa pagpapatuyo ng meniskus |
| Banlawan ng tubig | Ultrapure na tubig | 10-15 volume | Tinatanggal ang mga asing-gamot at pinaka maluwag na nakagapos na materyal |
| Panghugas ng sabong panlaba | 1-2% neutral na quartz-compatible surfactant | 5-10 minuto | Natutunaw ang protina at lipid films |
| Banlawan para sa pagtanggal ng detergent | Ultrapure na tubig | 10-15 volume | Ang natitirang detergent ay sumisipsip sa ibaba 220 nm, kaya ang pagbabanlaw ay dapat na bukas-palad |
| Pantunaw na banlawan | Optical-grade methanol o ethanol | 2-3 volume | Inililipat ang tubig, tinutunaw ang mga organikong nalalabi, pinapabilis ang pagkatuyo |
| pagpapatuyo | Na-filter na nitrogen o malinis na tuyong hangin | Hanggang sa ganap na matuyo | Pinipigilan ang mga spot ng tubig at mga deposito ng mineral |
Ang pagtatayo ng cuvette ay nakakaapekto rin kung gaano maaasahan ang pang-araw-araw na protocol. Ang isang ganap na pinagsamang one-piece na cell ay walang mga sementadong tahi na maaaring mag-trap ng solvent o magtanggal pagkatapos ng paulit-ulit na paglilinis. Ang mga quartz cuvette ng ganitong uri ay maaaring i-sonicated kung kinakailangan, samantalang ang dalawang-piraso na sementadong mga cell ay dapat na hawakan nang mas malumanay. Kapag pumipili ka ng bagong cuvette para sa gawaing CD, sulit na suriin kung ang mga optical na mukha ay pinakintab na fused silica at ang geometry ay ganap na pinagsama.
Fused Silica Quartz Cuvette para sa UV-Vis at Fluorescence Ang fully fused quartz cuvette na ito ay nababagay sa absorbance at fluorescence mula 170 hanggang 2700 nm. Ang makintab na optical na mga mukha at matatag na construction ay sumusuporta sa malalim na paglilinis at maaasahang pang-araw-araw na pag-verify. Tingnan ang Produkto → Kapag ang isang cuvette ay nabigo sa pag-verify pagkatapos ng araw-araw na protocol, ang mas malalim na paglilinis ay makatwiran. Ang pangunahing prinsipyo ay ang pumili ng isang reagent na umaatake sa deposito nang hindi umaatake sa kuwarts. Ang fused silica ay kemikal na matibay, ngunit hindi ito masisira: ito ay natutunaw sa hydrofluoric acid at dahan-dahang nag-uukit sa mainit na puro alkali. Ang bawat recipe ng malalim na paglilinis sa ibaba ay nirerespeto ang mga limitasyong iyon.
Ang mga pelikulang protina ay pinakamahusay na inalis sa pamamagitan ng panunaw sa halip na sa pamamagitan ng marahas na kimika. Ang isang karaniwang diskarte ay isang pepsin solution sa 1 hanggang 2 mg/mL sa 0.1 M hydrochloric acid, na incubated sa 37 degrees Celsius sa loob ng isa hanggang dalawang oras. Hinahati ng enzyme ang na-adsorbed na protina sa maliliit na peptide na madaling mabanlaw. Pagkatapos ng incubation, banlawan ang cuvette nang lubusan ng ultrapure na tubig, pagkatapos ay may methanol, pagkatapos ay tuyo na may nitrogen. Ang isa pang mabisang opsyon ay isang 0.5 hanggang 1 porsiyentong solusyon ng sodium dodecyl sulfate na pinainit hanggang 40 hanggang 50 degrees Celsius, na naglulusaw sa mga protina at lipid; ito ay dapat na banlawan ng mas lubusan dahil ang SDS mismo ay sumisipsip sa malayong-UV.
Ang sukat ng asin at mga deposito ng mineral ay tumutugon sa dilute acid. Ang nitric acid sa 1 hanggang 2 M ang karaniwang pagpipilian dahil natutunaw nito ang karamihan sa mga inorganic na residues at wala itong iniiwan sa sarili pagkatapos banlawan. Ibabad ng 15 hanggang 30 minuto sa temperatura ng silid. Huwag pagsamahin ang acid cleaning sa sonication, dahil ang vibration ay umaatake sa mga nakalantad na gilid ng lupa at nagpapabilis sa reaksyon. Ang mga pangkalahatang organikong pelikula ay tinanggal na may pagkakasunud-sunod ng solvent: methanol, pagkatapos acetone, pagkatapos ethanol, pagkatapos ay tubig. Ang sequence na ito ay nagsisimula sa isang water-miscible solvent, dissolves hydrophobic films, at nagtatapos sa isang solvent na humahalo sa tubig upang walang precipitation step na mangyari. Ang huling banlawan ng tubig ay nag-aalis ng lahat ng bakas ng mga organikong solvent. Ang acetone lamang ay hindi mainam bilang unang hakbang sa isang basang cuvette na kontaminado ng asin, dahil ang acetone ay namuo ng mga asin at maaaring ayusin ang mga protina sa ibabaw.
Ang mga demountable cuvettes ay nangangailangan ng ibang pamamaraan. Ang mga bintana ay dapat na ihiwalay, linisin nang isa-isa sa isang patag na PTFE o malinis na silid na punasan ang ibabaw na may solvent-moistened lint-free tissue, at tuyo sa isang malinis na daluyan ng hangin. Ang sobrang paghigpit ng metal na pabahay pagkatapos ng paglilinis ay isang karaniwang pagkakamali; sinisira nito ang mga bintana at lumilikha ng strain birefringence, na kung ano mismo ang hindi kayang tiisin ng pagsukat ng CD. Buuin muli nang mahigpit ang daliri kasama ang isang maliit na bahagi ng isang pagliko, at i-verify ang haba ng landas gamit ang isang reference na solusyon.
| Deposito | Inirerekomendang pamamaraan | Oras ng pakikipag-ugnayan | Huwag kailanman gamitin |
|---|---|---|---|
| Adsorbed protein film | Pepsin 1-2 mg/mL sa 0.1 M HCl sa 37 degrees Celsius | 1-2 oras | Mainit na puro alkali |
| Sukat ng asin at mineral | 1-2 M nitric acid sa temperatura ng kuwarto | 15-30 minuto | Hydrofluoric acid o anumang panlinis ng fluoride |
| Lipid na pelikula | 1-2% neutral surfactant sa 40 degrees Celsius | 10-15 minuto | Mga nakasasakit na pad o pulbos |
| Pangkalahatang organikong deposito | Methanol, pagkatapos ay acetone, pagkatapos ethanol, pagkatapos ay tubig | 2-3 volume of each | Tuyong punasan gamit ang mga tuwalya ng papel |
| Hindi alam o pinaghalong deposito | 10% nitric acid na sinusundan ng 1-2% surfactant | 30 minuto bawat isa | Self-heating mixtures tulad ng mainit na solusyon sa piranha |
Ang ultrasonic na paglilinis ay maaaring mapabilis ang bawat pamamaraan sa itaas, ngunit para lamang sa ganap na pinagsamang isang pirasong cuvette. Kung ang cuvette ay may sementadong bintana, ang joint ay maaaring tumagas o mabibigo sa ilalim ng ultrasonic vibration. Kapag may pagdududa, suriin ang dokumentasyon ng supplier bago maglagay ng cuvette sa isang ultrasonic bath. Ang isang cuvette na ginawa mula sa napakalaking makapal na pader na quartz ay kayang tiisin ang mga standard na laboratoryo ng sonication cycle na 5 hanggang 10 minuto, ngunit ang thin-walled fluorescence cells ay mas marupok.
Karamihan sa mga permanenteng pinsala sa cuvette ay sanhi hindi ng mga sample kundi ng mga pagkakamali sa paglilinis. Ang materyal mismo ay chemically stable, ngunit ang manipis na pinakintab na mga bintana ay madaling kapitan ng mga reagents, abrasive, at walang ingat na paghawak. Ang pag-unawa sa mga mode ng pagkabigo ay nagpoprotekta sa parehong cuvette at data ng CD. Ang talahanayan sa ibaba ay nagbubuod ng mga pinakakaraniwang error at ang kanilang mga kahihinatnan.
| Pagkakamali | Agad na epekto | Pangmatagalang pinsala |
|---|---|---|
| Paglilinis gamit ang hydrofluoric acid o mga produktong fluoride | Ang bintana ay nagiging maulap sa loob ng ilang minuto | Ang silica ay natunaw; dapat i-scrap ang cell |
| Mainit na puro NaOH o KOH | Nagsisimulang magyelo ang ibabaw | Permanenteng pag-ukit at matinding pagkalat ng liwanag |
| Mga scouring pad, abrasive na pulbos, o mga kasangkapang metal | Lumilitaw ang mga micro-scratch sa mga mukha | Magkakalat at maliwanag na mga artifact ng CD na gayahin ang mga tunay na banda |
| Tuyong punasan gamit ang mga tuwalya ng papel | Nakikitang hazing at lint | Hindi maibabalik na scratching ng pinakintab na kuwarts |
| Ultrasonic na paliguan para sa mga sementadong selula | Maaaring tumagas o bumuka ang kasukasuan | Nawala ng cell ang pagkakalibrate ng pathlength |
| Organic solvent bago alisin ang mga may tubig na asing-gamot | Namuo ang mga kristal ng asin | Ang mga kristal ay maaaring kumamot sa cell kapag pinunasan |
| Sample na naiwan sa cell magdamag | Matigas na protina at salt film forms | Nangangailangan ng agresibong paglilinis na maaaring makapinsala mismo sa ibabaw |
| Paghuhugas ng tubig sa gripo | Ang mga metal ions ay nagdeposito sa silica | UV absorption at extra baseline offset |
| Paulit-ulit na autoclaving ng mga naka-assemble na cell | Unti-unting akumulasyon ng stress | Salain ang birefringence at baluktot na baseline ng CD |
Ang solusyon ng piranha, isang pinaghalong puro sulfuric acid at hydrogen peroxide, ay minsan ginagamit sa paglilinis ng microelectronics. Para sa mga optical cuvettes ito ay karaniwang hindi inirerekomenda. Ang reaksyon ay exothermic at maaaring mag-etch o cloud quartz kung tumaas ang temperatura; nagpapakita rin ito ng malubhang panganib sa kaligtasan sa laboratoryo. Kung ang isang deposito ay lumalaban sa nitric acid at detergent, ang cuvette ay mas matipid na papalitan kaysa sa panganib sa isang piranha bath.
Ang pag-verify ay ang hakbang na nilaktawan ng karamihan sa mga laboratoryo, at ito ang hakbang na nakakakuha ng mga problema bago ang pangongolekta ng data. Hindi sapat ang visual check dahil karamihan sa mga pelikulang nauugnay sa CD ay sub-monolayer. Ang sumusunod na pagkakasunud-sunod ay lumilipat mula sa simpleng inspeksyon hanggang sa mga pagsubok na nakabatay sa instrumento.
Ang cuvette ay maaari pa ring i-save
| Ang cuvette ay dapat mapalitan
|
Ang mga halaga ng threshold sa itaas ay mga praktikal na default na ginagamit sa mga laboratoryo ng protina CD. Ang isang cuvette na pumasa sa lahat ng anim na tseke ay hindi magiging limitasyon sa iyong pagsukat. Kung nabigo ang pag-verify, ulitin ang malalim na paglilinis nang isang beses; kung ito ay mabigo muli, palitan ang cell sa halip na gumugol ng mas maraming oras sa isang nawawalang dahilan.
Ang pinakamahusay na protocol ng paglilinis ay nagsisimula sa desisyon sa pagbili. Ang isang cuvette na wastong tinukoy para sa CD ay maglilinis nang mas mabilis, mas madaling magbe-verify, at gagawa ng mas maraming reproducible na baseline sa buong buhay nito. Tatlong desisyon ang nangingibabaw: materyal na grado, pagbuo ng cell, at haba ng landas.
Tinutukoy ng grado ng materyal ang pinakamaikling magagamit na wavelength. Para sa malayong UV CD na mas mababa sa 210 nm, tukuyin ang JGS1 synthetic fused silica na may dokumentadong transmission sa hanay na 170 hanggang 220 nm. Ang JGS2 fused quartz ay tinatanggap para sa mga sukat na nananatili sa itaas ng 210 nm. Ang grado ay dapat na nakasaad sa sertipiko ng tagapagtustos; kung hindi, ang cuvette ay malamang na hindi inilaan para sa CD. Tinutukoy ng konstruksiyon ang pagiging tugma sa paglilinis. Ang ganap na pinagsamang one-piece na mga cell ay walang organikong pandikit at maaaring ibabad sa alinman sa mga solusyon sa paglilinis na nakalista sa itaas, kabilang ang maikling sonication. Ang mga sementadong selula ay mas mura ngunit hindi angkop para sa agresibong paglilinis. Ang mga demountable cell ay nag-aalok ng pinakamahusay na access sa mga bintana para sa malalim na paglilinis at ang mga karaniwang pagpipilian para sa napakaikling pathlength. Ang mga card sa ibaba ay nagbubuod sa mga karaniwang pathlength at ang kanilang mga inirerekomendang CD application.
Gamitin para sa puro protina sample at mga sukat hanggang sa 185 nm. Dami ng sample mga 10-20 µL. Madalas na ibinibigay bilang isang demountable cell upang maiwasan ang bubble trapping.
Magandang kompromiso para sa malayong UV CD sa pagitan ng 185 at 220 nm. Dami ng humigit-kumulang 50-100 µL. Inirerekomenda para sa 5 hanggang 20 mg/mL na solusyon sa protina.
Ang pinakakaraniwang pathlength ng CD. Dami ng humigit-kumulang 100-200 µL. Angkop para sa malayo-UV at malapit-UV na mga sukat na may katamtamang sample na konsentrasyon.
Pinapalawak ang sensitivity para sa malapit-UV CD habang pinapayagan pa rin ang malayong UV na trabaho. Dami ng humigit-kumulang 200-400 µL.
Pinakamahusay para sa malapit-UV CD ng mga aromatic residues at cofactor na higit sa 250 nm. Dami ng humigit-kumulang 500-1000 µL.
Karaniwang pathlength para sa UV-Vis at malapit sa UV CD; sa pangkalahatan ay masyadong sumisipsip para sa malayong-UV sa ibaba 200 nm na may mga may tubig na buffer. Dami ng mga 1-2 mL.
Higit pa sa pathlength, isaalang-alang ang kumpletong optical path. Ang mga mukha ng bintana ay dapat na pinakintab sa isang mababang detalye ng scratch-dig, at ang cuvette ay dapat na walang strain birefringence; ang isang simpleng pagsubok sa pagitan ng mga crossed polarizer ay nagpapakita ng labis na strain. Ang mga cuvette na may itim na dingding o nakamaskara na mga bintana ay kapaki-pakinabang para sa pag-aaral ng fluorescence ngunit hindi kailangan para sa karaniwang CD. Ang konstruksiyon na walang metal ay isang kalamangan kung ang cuvette ay gagamitin kasama ng mga buffer na umaatake sa mga metal na frame.
Transparent na Quartz Glass Cuvette para sa Mga Instrumentong Optical Idinisenyo para sa UV-Vis at fluorescence spectrophotometers, ang quartz cuvette na ito ay lumalaban sa karamihan ng mga kemikal at pinahihintulutan ang mataas na temperatura ng pagpapatakbo. Ang optical na kalinawan at tibay nito ay ginagawang praktikal ang paghawak at pangmatagalang imbakan. Tingnan ang Produkto → Kung paano iniimbak at pinangangasiwaan ang isang cuvette sa pagitan ng mga sukat ay tumutukoy kung gaano kadalas ito dapat linisin. Kinukuha ng fused silica window ang mga pelikula mula sa airborne dust, fingerprints, at maging ang mga singaw ng mga organikong solvent na nakaimbak sa parehong cabinet. Ang mga sumusunod na gawi ay magpapanatili ng isang cuvette sa optical na kondisyon sa loob ng maraming taon.
Mga panuntunan sa pangangasiwa: hawakan lamang ang mga cuvette sa gilid ng mga dingding sa gilid o sa itaas na gilid, magsuot ng walang pulbos na nitrile na guwantes, at gumamit ng PTFE-tipped tweezers kapag naglilipat ng cell. Huwag kailanman hawakan ang pinakintab na optical na mga mukha. Gumamit ng nakalaang, soft-lineed na cuvette case para sa pag-iimbak at transportasyon, at panatilihing patayo o nakalagay ang mga cell sa isang malinis na lint-free na ibabaw. Ang glass-to-glass contact, na nangyayari kapag ang mga cuvette ay nakasalansan sa isang drawer, ay isang karaniwang pinagmumulan ng mga edge chips.
Mga panuntunan sa pag-iimbak: ang mga cuvette ng tindahan ay walang laman at tuyo habang ang takip o takip ay tinanggal o inilagay nang maluwag, upang ang kahalumigmigan ay hindi matunaw sa loob. Huwag mag-imbak ng mga cuvette na nakalubog sa solvent, methanol, o tubig; Ang matagal na pakikipag-ugnay sa solvent ay maaaring lumambot sa mga sementadong selula, at ang tumatayong tubig ay naghihikayat sa mga algae o bacterial film. Muling linisin ang isang nakaimbak na cuvette pagkatapos ng higit sa isang linggo ng hindi paggamit, dahil kahit na walang alikabok na imbakan ay nagbibigay-daan sa isang manipis na organikong pelikula na maipon sa fused silica.
Iskedyul ng pagpapanatili: siyasatin ang lahat ng CD cuvettes linggu-linggo para sa mga nakikitang pelikula at mga gasgas; malalim na linisin ang mga ito sa buwanang pag-ikot, o mas maaga kung hindi na malinis ang mga pagsusuri sa baseline; palitan ang isang cuvette pagkatapos ng dalawang magkasunod na nabigong pag-verify. Kung ang laboratoryo ay nagpapatakbo ng CD araw-araw, panatilihin ang hindi bababa sa dalawang magkatugmang cuvettes bawat buffer system upang ang isa ay malinis habang ang isa ay ginagamit. Ang isang mabilis na pag-scan ng UV-Vis transmission sa isang malinis na walang laman na cuvette bawat ilang buwan ay nagpapatunay kung ang window ay unti-unting tumatanda.
Para sa mga laboratoryo, distributor, at mga mamimili ng OEM, ang pangmatagalang halaga ng isang cuvette ay pinangungunahan ng pagkakapare-pareho at pagiging malinis nito, hindi sa paunang presyo nito. Ang isang cuvette mula sa isang tagagawa ng quartz na may kontroladong optical-grade raw na materyal at dokumentadong pagpoproseso ay muling maglilinis sa loob ng maraming taon; ang murang cell na walang tiyak na grado ay magbubunga ng mga banayad na pagkakaiba-iba ng baseline na mahirap masubaybayan. Ito ang dahilan kung bakit dapat ituring ang pagkuha bilang bahagi ng sistema ng kalidad.
Kapag humiling ka ng mga panipi mula sa isang tagagawa o supplier ng quartz cuvette, humingi ng partikular na dokumentasyon. Ang materyal na grado ay dapat na nakasaad bilang JGS1, JGS2, o isang katumbas na internasyonal na pagtatalaga. Ang supplier ay dapat magbigay ng sinusukat na transmission curve sa hanay na 190 hanggang 260 nm, isang pathlength tolerance ng plus o minus na 0.01 mm o mas mataas, at kumpirmasyon na ang mga bintana ay walang strain. Para sa trabaho sa CD, mas mahalaga ang strain-free na certification kaysa sa UV-Vis, dahil ang birefringence ay lumilikha ng direktang optical artifact. Hilingin din ang pagiging tugma sa paglilinis ng cell: kung ito ay ganap na pinagsama o semento, at kung ito ay maaaring sonicated.
Para sa mga mamamakyaw at distributor na bumibili sa dami, ang packaging at traceability ay mahalaga gaya ng optika. Ang mga cell ay dapat dumating sa mga indibidwal na kaso ng proteksyon na may mga numero ng lot sa label. Ang pagkakapare-pareho ng batch-to-batch ay kritikal; pinipigilan ng isang sertipiko para sa bawat batch ang isang sitwasyon kung saan ang isang cuvette ay kumikilos nang iba sa iba. Ito ay nagkakahalaga ng pagtatanong kung nag-aalok ang tagagawa ng mga custom na dimensyon, demountable na disenyo, at mga custom na window nang walang malalaking minimum-order na dami. Ang Yancheng Mingyang Quartz Products Co., Ltd. ay isang quartz products manufacturer sa Yancheng, China, at nagsisilbing pasilidad ng produksyon ng Jinzhou Mingde Quartz Glass Co., Ltd.; ang kumpanya ay gumagawa ng quartz cuvettes, laboratory quartzware, optical quartz plates, at custom na quartz component para sa laboratoryo at pang-industriyang mga customer sa buong mundo. Ang direktang relasyon ng tagagawa ay nagbibigay sa mamimili ng kontrol sa grado, sertipikasyon, at custom na katha.
Mayroon bang pinakamahusay na paraan para sa paglilinis ng quartz cuvettes para sa CD spectroscopy?Ang pinaka-maaasahang paraan ay ang karaniwang pagkakasunud-sunod: alisan ng tubig ang sample, banlawan ng buffer, banlawan ng ultrapure na tubig, hugasan ng 1-2 porsiyento na neutral na quartz-compatible na detergent, banlawan muli ng tubig, banlawan ng methanol o ethanol, at tuyo ng nitrogen. Ang mahalagang punto ay huwag hayaang matuyo ang sample sa cell at i-verify ang resulta gamit ang 220 nm water baseline. |
Maaari ba akong gumamit ng ultrasonic bath para linisin ang CD quartz cuvettes?Kung ang cuvette ay may ganap na pinagsamang one-piece na konstruksyon. Ang mga semento o dalawang bahagi na cuvettes ay maaaring maghiwalay o tumagas sa ilalim ng ultrasonic vibration. Suriin ang dokumentasyon ng tagagawa; kapag may pagdududa, gumamit na lang ng manual soaking. |
Paano ko aalisin ang isang protina na pelikula na hindi natanggal sa detergent?Gumamit ng enzymatic digest tulad ng pepsin sa 1 hanggang 2 mg/mL sa 0.1 M hydrochloric acid sa 37 degrees Celsius sa loob ng isa hanggang dalawang oras. Banlawan ng maigi pagkatapos. Iwasan ang mainit na sodium hydroxide, na mag-ukit sa quartz window. |
Talaga bang nakakaapekto ang fingerprint sa mga sukat ng CD?Oo, at kapansin-pansing. Ang mga residue ng fingerprint ay naglalaman ng mga amino acid at fatty acid na sumisipsip sa ibaba 250 nm; ang isang hindi sinasadyang pagpindot ay maaaring magdagdag ng 0.05 hanggang 0.1 AU sa 220 nm at sirain ang baseline flatness. Palaging hawakan ang mga cuvette sa tabi ng nagyelo na mga dingding habang nakasuot ng guwantes na walang pulbos. |
Gaano kadalas dapat linisin ang quartz cuvettes para sa CD spectroscopy?Pagkatapos ng bawat paggamit, lalo na kapag ang sample ay naglalaman ng mga protina, lipid, o asin. Patuyuin at banlawan ang cuvette kaagad pagkatapos ng pagsukat. Ang mga cuvette na hindi nagamit nang higit sa isang linggo ay dapat na muling linisin bago ang susunod na hanay ng pagsukat. |
Kailan dapat palitan ang isang quartz cuvette sa halip na linisin?Palitan ang cuvette kapag ang dalawang magkasunod na deep-cleaning cycle ay hindi naibalik ang baseline, kapag ang isang nakikitang scratch ay tumatawid sa optical face, kapag ang cell ay tumutulo, o kapag ang surface frosting ay nagpapahiwatig ng pag-ukit. Ang isang fused silica cuvette na hinahawakan nang tama ay maaaring tumagal ng maraming taon; ang karaniwang mga sanhi ng maagang pagkabigo ay hydrofluoric acid, mainit na puro alkali, at mekanikal na abrasion. |
Para sa mga detalye ng cuvette, karaniwang geometries, at available na mga marka ng quartz mula sa hanay ng produksyon, tingnan ang quartz cuvettes para sa spectroscopy pahina.
Kung ang iyong CD application ay nangangailangan ng hindi karaniwang pathlength, isang demountable na disenyo, o isang partikular na fused silica grade, ang custom na quartzware fabrication sinusuportahan ng serbisyo ang one-off at batch na produksyon.
Bilang tagagawa at supplier ng mga produktong quartz, ang Yancheng Mingyang Quartz Products Co., Ltd. ay gumagawa ng quartz cuvettes, laboratory quartzware, optical quartz plates, at mga kaugnay na bahagi para sa CD spectroscopy, UV-Vis analysis, at iba pang optical application. Ang kumpanya ay nagpapatakbo bilang pasilidad ng pagmamanupaktura ng Jinzhou Mingde Quartz Glass Co., Ltd., na nagsisilbi sa mga customer ng laboratoryo, industriyal, at pakyawan sa mga pandaigdigang merkado.